Tách dòng sáu gen khung virus cúm A/H5N1 vào vector pHW2000 phục vụ tạo chủng gốc vaccine cúm bằng kỹ thuật di truyền ngược
Main Article Content
Abstract
Virus H5N1 thuộc chi virus cúm A, họ Orthomyxoviridae. Trong nhóm virus cúm A, H5N1 thuộc phân type có độc lực cao nhất, thường gây chết gia cầm hàng loạt và có khả năng lây sang người với dấu hiệu lâm sàng trầm trọng và tỷ lệ tử vong cao. Phương pháp phòng chống hiệu quả loại virus H5N1 là tiêm phòng vaccine. Vaccine cúm có hiệu quả cao và an toàn nhất hiện nay là vaccine được sản xuất bằng kỹ thuật di truyền ngược - cho phép thao tác với genome của virus, tái tạo hạt virus từ các cDNA tách dòng sau khi chuyển nạp vào tế bào động vật. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tách dòng thành công sáu phân đoạn RNA (M, NP, NS, PA, PB1, PB2) của virus cúm vào vector pHW2000. Sáu plasmid tái tổ hợp khi kết hợp với plamid mang gen H5 và N1, biến nạp vào tế bào động vật sẽ là nguồn tái tạo chủng virus tái tổ hợp làm giống gốc cho sản xuất vaccine phòng chống cúm H5N1.
References
2. Bosch F. X., Garten W., Klenk H. D., and Rott R. - Proteolytic cleavage of influenza virus hemagglutinins, primary structure of the connecting peptide between HA1 and HA2 determines proteolytic cleavability DNA pathogenicity of avian influenza viruses, Virology 113 (1981) 725-773.
3. Tung D. H., Quyen D. V., Tung N., Hanh T. X., Thang N. N., and Khang D. D. - Molecular characterization of a H5N1 highly pathogenic avian influenza virus clade 2.3.2.1b circulating in Vietnam in 2011, Veterinary Microbiology 165 (2013) 341-348.
4. Hoàng Thị Thu Hằng, Nguyễn Trung Nam, Nguyễn Thị Bích Nga, Đinh Duy Kháng, Lê Thanh Hòa, Lê Trần Bình - Áp dụng phương pháp đột biến điểm định hướng Phoenix để loại bỏ đoạn độc trong gen Hemagglutinin (HA) của virus cúm A/H5N1, Tạp chí Công nghệ Sinh học 6 (2008) 555-561.
5. Suzuki T., Takahashi T., Guo C. T., Kazuya I. P., Hidari J., Miyamoto D., and Goto H. - Sialidase activity of influenza A virus in an endocytic pathway enhances viral replication, Journal of Virology 79 (2005) 11705-11715.
6. Ping J., Lopes T. J., Nidom C. A., Ghedin E., Macken C. A., Fitch A., Imai M., Maher E. A., Neumann G., and Kawaoka Y. - Development of high-yield influenza A virus vaccine viruses, Nature Communications 6 (2015) 8148.
7. Shigaki T. and Hirschi K. D. - Use of class II restriction enzymes for site-directed mutagenesis: variations on Phoenix mutagenesis, Analytical Biochemistry 298 (2001) 118-120.
8. Allemandou F., Nusberger J., Brunner H. R., and Brakch N. - Rapid site-directed mutagenesis using two-PCR-generated DNA fragments reproducing the plasmid template, Journal of Biomedicine and Biotechnology 3 (2003) 202-207.
9. Chen X., Liu W., Quinto I., and Scala G. - High efficiency of site-directed mutagenesis mediated by a single PCR product, Nucleic Acids Research 25 (1997) 682-684.
10. Hoffmann E., Neumann G., Kawaoka Y., Hobom G., and Webster R. G. - A DNA transfection system for generation influenza A virus from eight plasmids, Proc. Acad. Sci. USA, 97 (2000) 6108-6113.
11. Czudai-Matwich V., Schnare M., and Pinkenburg O. - A simple and fast system for cloning influenza A virus gene segments into pHW2000- and pCAGGS-based vectors, Archives of Virology 158 (2013) 2049-2058.
12. Hoffmann E., Krauss S., Perez D., and Webster R. G. - Eight-plasmid system for rapid generation of influenza virus vaccines, Vaccine 30 (2002) 3165-3170.